Aislamiento enzimático de protoplastos a partir del mesófilo de vitroplantas de Gynerium sagittatum Aubl. Beauv. cv. "Criolla"

Gynerium sagittatum es una gramínea ampliamente utilizada en la costa Caribe colombiana como fuente de fibra natural para la elaboración de artesanías, particularmente por la comunidad Zenú. En la presente investigación se evaluó el efecto de diferentes concentraciones de enzimas: celulasa y macerozima a diferentes tiempos de incubación y sus interacciones en el aislamiento de protoplastos. Los protoplastos se obtuvieron del mesófilo foliar de vitroplantas de G. sagittatum expuesto a combinaciones enzimáticas de celulasa (1.5 y 2.0%), con macerozima (0.3, 0.6 y 0.9%), durante 3, 6 y 9 horas de incubación, para un total de 18 tratamientos con 5 réplicas cada uno. Los mayores números de protoplastos aislados correspondieron a T18 (2.0% celulasa, 0.9% macerozima), T12 (2.0% de celulasa, 0.3% macerozima), T3 (1.5% de celulasa, 0.3% de macerozima) y T6 (1.5% de celulasa, 0.6% de macerozima) por 9 horas de incubación cada uno, con valores de 88.625, 83.000, 75.000 y 53.375 protoplastos/mL respectivamente. El tiempo de incubación fue significativo en el aislamiento de los protoplastos (p<0.05). Las predicciones entre factores mostraron que una interacción de 2.0% de celulasa y 0.9% de macerozima permite obtener 44.302 protoplastos/mL, mientras que las interaciciones tiempo de incubación-celulasa y tiempo de incubación-macerozima mostraron que es posible obtener 72.073 y 71.212 protoplastos/mL con 2.0% de celulasa y 0.9% macerozima por 9 horas de incubación cada una respectivamente. Los resultados indican que la aplicación de estas enzimas permite obtener cantidades considerables de protoplastos de G. sagittatum a partir de explantes cultivados in vitro.

Gynerium sagittatum is a graminaceous plant widely used in the Caribbean coast of Colombia as a natural fiber source for the elaboration of handicrafts, particularly by the Zenú community. In the present investigation, the effect of different concentrations of cellulase and macerozyme enzymes at different incubation times and their interaction in the isolation of protoplasts was evaluated. Protoplasts were obtained from leaf mesophyll of G. sagittatum vitroplants exposed to enzymatic combinations of cellulase (1.5 and 2.0%), with macerozyme (0.3, 0.6 and 0.9%), for 3, 6 and 9 hours of incubation, for a total of 18 treatments with 5 replicates each. The highest numbers of isolated protoplasts corresponded to T18 (2.0% cellulase, 0.9% macerozyme), T12 (2.0% cellulase, 0.3% macerozyme), T3 (1.5% cellulase, 0.3% macerozyme) and T6 (1.5% cellulase, 0.6% macerozyme); at 9 hours incubation. The protoplast number for these treatments were: 88.625, 83.000, 75.000 and 53.375 protoplasts/mL respectively. Incubation time was significant in the isolation of protoplasts (p<0.05). The predictions between the factors showed that with an interaction of 2.0% cellulase and 0.9% macerozyme it is possible to obtain 44.302 protoplasts/mL, likewise, the incubation time-cellulase and incubation time-macerozyme interactions showed that it is possible to obtain 72.073 and 71.212 protoplasts/mL with 2.0% cellulase and 0.9% macerozyme for 9 hours of incubation respectively. The results indicate that the use of these enzymes and time, allows the isolation of of protoplasts from G. sagittatum in vitro plants.

Cutibacterium spp. isolated from orthopaedic implant-associated infection: A not-so-slowly growing organism.

INTRODUCTION: It has been reported that microbiological diagnosis of Cutibacterium spp. infection requires a prolonged incubation time (up to 14 days). We present our experience with regard to incubation time for detection of Cutibacterium spp. in orthopaedic samples over a 10-year period. METHODS: One hundred and nineteen samples were included in this retrospective study. Fifty-three were implants (having previously undergone sonication), 64 were periprosthetic tissue biopsies and two were synovial fluids. Atkins's criteria were used for interpreting the isolates. Quantification and number of days until a culture became positive for Cutibacterium spp. were evaluated. RESULTS: The median number of days to detection of a clinically significant isolate and a contaminant was 4 days. No clinically significant isolates grew after day eight. CONCLUSION: Most clinically significant isolates of Cutibacterium spp. are detected in the first 7 days of incubation, although a recommendation of prolonged incubation (up to 14 days) appears to be necessary for detecting other organisms.

Cutibacterium spp. isolated from orthopaedic implant-associated infection: A not-so-slowly growing organism / Cutibacterium spp. aislados de infecciones ortopédicas asociadas a implantes: Un microorganismo de crecimiento no tan lento

Introduction: It has been reported that microbiological diagnosis of Cutibacterium spp. infection requires a prolonged incubation time (up to 14 days). We present our experience with regard to incubation time for detection of Cutibacterium spp. in orthopaedic samples over a 10-year period. Methods: One hundred and nineteen samples were included in this retrospective study. Fifty-three were implants (having previously undergone sonication), 64 were periprosthetic tissue biopsies and two were synovial fluids. Atkins's criteria were used for interpreting the isolates. Quantification and number of days until a culture became positive for Cutibacterium spp. were evaluated. Results: The median number of days to detection of a clinically significant isolate and a contaminant was 4 days. No clinically significant isolates grew after day eight. Conclusion: Most clinically significant isolates of Cutibacterium spp. are detected in the first 7 days of incubation, although a recommendation of prolonged incubation (up to 14 days) appears to be necessary for detecting other organisms.(AU)

Introducción: Se ha reportado que el diagnóstico microbiológico de las infecciones por Cutibacterium spp. requiere un tiempo de incubación prolongado (hasta 14 días). Presentamos nuestra experiencia al respecto en muestras ortopédicas durante un período de 10 años. Métodos: Se incluyeron en este estudio retrospectivo 119 muestras de las que 53 fueron implantes (previa sonicación), 64 biopsias de tejido periprotésico y dos líquidos sinoviales. Para la interpretación se siguieron los criterios de Atkins. Se evaluó la cuantificación y el número de días hasta que el cultivo fue positivo para Cutibacterium spp. Resultados: La mediana del número de días para detectar un aislado clínicamente significativo y un contaminante fue de cuatro días. Ningún aislado clínicamente relevante creció después del día ocho. Conclusión: La mayoría de aislados clínicamente significativos de Cutibacterium spp. se detectan durante los siete primeros días de incubación, sin embargo, parece necesaria una incubación de hasta 14 días para la detección de otros microorganismos.(AU)

Efectos de la temperatura, la actividad de agua y el tiempo de incubación en el crecimiento fúngico y la producción de aflatoxina B1 por aislados toxicogénicos de Aspergillus flavus en sorgo / Effects of temperature, water activity and incubation time on fungal growth and aflatoxin B1 production by toxinogenic Aspergillus flavus isolates on sorghum seeds

Sorghum, which is consumed in Tunisia as human food, suffers from severe colonization by several toxigenic fungi and contamination by mycotoxins. The Tunisian climate is characterized by high temperature and humidity that stimulates mold proliferation and mycotoxin accumulation in foodstuffs. This study investigated the effects of temperature (15, 25 and 37 °C), water activity (a w, between 0.85 and 0.99) and incubation time (7, 14, 21 and 28 d) on fungal growth and aflatoxin B1 (AFB1) production by three Aspergillus flavus isolates (8, 10 and 14) inoculated on sorghum grains. The Baranyi model was applied to identify the limits of growth and mycotoxin production. Maximum diameter growth rates were observed at 0.99 a w at 37 °C for two of the isolates. The minimum a w needed for mycelial growth was 0.91 at 25 and 37 °C. At 15 °C, only isolate 8 grew at 0.99 a w. Aflatoxin B1 accumulation could be avoided by storing sorghum at low water activity levels (≤0.91 a w). Aflatoxin production was not observed at 15 °C. This is the first work on the effects of water activity and temperature on A. flavus growth and AFB1 production by A. flavus isolates on sorghum grains.

El sorgo, que se consume en Túnez como alimento humano, puede sufrir la colonización severa de varios hongos toxicogénicos, con la consiguiente bioacumulación de micotoxinas. Además, el clima de Túnez, caracterizado por las altas temperaturas y humedad, estimula el crecimiento fúngico y la acumulación de micotoxinas en los productos alimenticios. Este estudio investigó los efectos de la temperatura (15, 25 y 37 °C), la actividad de agua (a w) (entre 0,85 y 0,99) y el tiempo de incubación (7, 14, 21 y 28 días) sobre el crecimiento y la producción de aflatoxina B1 (AFB1) de 3 aislados de Aspergillus flavus (designados como 8, 10 y 14) que se inocularon sobre granos de sorgo. El modelo Baranyi se aplicó para identificar los límites del crecimiento y la producción de micotoxinas. Las tasas máximas de crecimiento para 2 de los aislados se observaron en la combinación 0,99 a w y 37 °C. La a w mínima necesaria para el crecimiento del micelio fue de 0,91 a 25 °C y 37 °C. A 15 °C, solo el aislado 8 creció a 0,99 a w, pero fue incapaz de producir la aflatoxina B1. Es posible evitar la acumulación de aflatoxina B1 en el sorgo almacenándolo a baja actividad de agua (≤ 0,91 a w). Este es el primer trabajo que ha estudiado el efecto de la actividad del agua y la temperatura sobre el crecimiento de aislados de A. flavus y su producción de aflatoxina B1 en granos de sorgo.

Effects of temperature, water activity and incubation time on fungal growth and aflatoxin B1 production by toxinogenic Aspergillus flavus isolates on sorghum seeds.

Sorghum, which is consumed in Tunisia as human food, suffers from severe colonization by several toxigenic fungi and contamination by mycotoxins. The Tunisian climate is characterized by high temperature and humidity that stimulates mold proliferation and mycotoxin accumulation in foodstuffs. This study investigated the effects of temperature (15, 25 and 37°C), water activity (aw, between 0.85 and 0.99) and incubation time (7, 14, 21 and 28 d) on fungal growth and aflatoxin B1 (AFB1) production by three Aspergillus flavus isolates (8, 10 and 14) inoculated on sorghum grains. The Baranyi model was applied to identify the limits of growth and mycotoxin production. Maximum diameter growth rates were observed at 0.99 a(w) at 37°C for two of the isolates. The minimum aw needed for mycelial growth was 0.91 at 25 and 37°C. At 15°C, only isolate 8 grew at 0.99 a(w). Aflatoxin B1 accumulation could be avoided by storing sorghum at low water activity levels (≤0.91 a(w)). Aflatoxin production was not observed at 15°C. This is the first work on the effects of water activity and temperature on A. flavus growth and AFB1 production by A. flavus isolates on sorghum grains.

Qualidade da água do rio das pedras, oeste do Paraná, utilizando macroinvertebrados bentônicos como bioindicadores / Water quality at rio das pedras, western Paraná, using benthic macroinvertebrates as indicators / Calidad de las aguas del rio das pedras, oeste del Paraná, utilizando macroinvertebrados bentónicos como bioindicadores

Os macroinvertebrados bentônicos são amplamente utilizados como bioindicadores de qualidade da água em todo o mundo, devido, as suas características fisiológicas e morfológicas. O objetivo do estudo foi avaliar a qualidade da água do rio das Pedras,no município de Matelândia, Oeste do Estado do Paraná, na estação seca, utilizando-se de macroinvertebrados bentônicos como bioindicador, e identificar o tempo ideal de incubação dos litter bags. Sessenta litter bags foram confeccionados com folhas de árvores nativas provenientes da floresta ripária e incubadosno rio das Pedras. Oito litter bags foram coletados nos intervalos de três, sete,14, 28, 35 e 42 dias. Os macroinvertebrados bentônicos foram identificados em nível de família e foi aplicado o índice Biological Monitoring Working Party Score System. Com este estudo concluiu-se que o rio das Pedras possui águas não poluídas, demonstrando que o sistema é perceptivelmente não alterado. O tempo de incubação dos litter bags para obtenção do resultado quanto à avaliação da qualidade de água pelo índice Biological Monitoring Working Party Score System foi de sete dias e para analisar a estrutura da comunidade de macroinvertebrados bentônicos foi de 28 dias.

Benthic macroinvertebrates are widely used as bioindicators of water quality due to their physiological and morphological characteristics. The aim of this study was to evaluate the water quality at Rio das Pedras, in the city of Matelândia, Western Paraná, in the dry season, using benthic macroinvertebrates as bioindicators, and to identify the optimal time for the incubation of litter bags. Sixty litter bags were prepared with leaves from native trees from the riparian forest and incubated in Rio das Pedras river. Eight litter bags were collected at intervals of 3, 7, 14, 28, 35 and 42 days. The benthic macroinvertebrates were identified at the family level and the Biological Monitoring Working Party Score System index was applied. With this study, it can be concluded that the Rio das Pedras river has unpolluted waters, demonstrating that the system has hardly been changed. The litter bag incubation period in order to obtain the results for evaluating the water quality index for the Biological Monitoring Working Party Score System was of seven days, and the period to analyze the structure of the benthic macroinvertebrate community was of 28 days.

Los macroinvertebrados bentónicos son ampliamente utilizados como bioindicadores de calidad del agua en todo el mundo, debido sus características fisiológicas y morfológicas. El objetivo de este estudio ha sido evaluar la calidad de las aguas del Rio das Pedras, en el municipio de Matelândia, oeste del Estado de Paraná, en la estación seca, utilizándose de macroinvertebrados bentónicos como bioindicador, e identificar el tiempo ideal de incubación de los litter bags. Sesenta litter bags han sido confeccionados con hojas de árboles nativas procedentes de la floresta ribera e incubados en el Rio das Pedras. Ocho litter bags fueron recogidos en intervalos de tres, siete, catorce, veintiocho, treinta y cinco y cuarenta y dos días. Los macroinvertebrados bentónicos fueron identificados en nivel de familia y aplicado el índice Biological Monitoring Working Party Score System. Con esta investigación se ha concluido que el Rio das Pedras no tiene aguas contaminadas, demostrando que el sistema no es alterado. El tiempo de incubación de los litter bags para obtención del resultado cuanto a la evaluación de la calidad del agua por el índice Biological Monitoring Working Party Score System fue de siete días, y para analizar la estructura de la comunidad de macroinvertebrados bentónicos fue de 28 días.

Time-dependence of Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) index in Chilean apples and berries / Influencia del tiempo de incubación sobre la capacidad antioxidante medida según FRAP, en manzanas y berries chilenos

We hypothesize that the Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) assay that follows the reaction of Fe3+-TPTZ at 593 nm underestimates the antioxidant capacity of fruits, since the standardized time of the reaction (4 min) is not enough to titrate all the reducing compounds available. We measured FRAP, total phenolics and anthocyanins content in a variety of Chilean berry fruits (blueberries, blackberries, raspberries and strawberries) and apples (cv. Fuji, Granny Smith, Pink Lady, Red Delicious and Royal Gala). Taking into account the dependence of FRAP on the time course of the reaction, we propose to measure FRAP indexes after 1 min (FRAP-1), 30 min (FRAP-30) and 120 min (FRAP-120) of incubation. Most fruit extracts showed significant correlations between the antioxidant capacity and the incubation time, although in some cases the FRAP indexes did not correlate with the total phenolics and/or anthocyanins content. In fact, in apples and berries the correlation between anthocyanins content and FRAP indexes decreased with the incubation time. It is concluded that the fruit extracts analyzed require an incubation period higher than the established in the original experimental protocol to reach the equilibrium, due to the presence of a complex mixture of antioxidant compounds. In addition, a kinetic profile should be realized in each sample studied to establish the most suitable incubation period to titrate all the reactive antioxidant species.

Se plantea que el ensayo de la capacidad antioxidante de frutas, medido según el poder reductor de hierro (FRAP), que sigue la reacción de Fe3+-TPTZ a 593 nm, subestima la capacidad antioxidante, debido a que el tiempo de reacción (4 min) no sería suficiente para que reaccionen todos los compuestos reductores disponibles en las muestras. Se analizó la capacidad antioxidante FRAP, el contenido de fenoles y de antocianinas en diversos berries (arándano, mora, frambuesa y frutilla) y manzanas (cv. Fuji, Granny Smith, Pink Lady, Red Delicious y Royal Gala). Tomando en cuenta la dependencia del tiempo de incubación en el valor FRAP, se propone medir los índices FRAP después de 1 min (FRAP-1), 30 min (FRAP-30) y 120 min (FRAP-120). Diversos extractos de las frutas analizadas mostraron una correlación significativa entre la capacidad antioxidante y el tiempo de incubación; sin embargo, en algunos casos los índices FRAP no se correlacionaron con el contenido de fenoles totales y/o antocianinas. En efecto, en manzanas y berries la correlación entre el contenido de antocianinas e índices FRAP disminuyó con el tiempo de incubación. Se concluye que los extractos analizados requieren un tiempo de incubación mayor al que establece el protocolo analítico original para alcanzar el equilibrio, debido a la presencia de una compleja mezcla de compuestos antioxidantes. Además, el perfil cinético de cada muestra debería ser estudiado para establecer el periodo de incubación más adecuado para titular todas las especies antioxidantes reactivas.